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【技术干货】大小鼠脑卒中手术MCAO造模如何提高成功率?

时间:2020-09-26     作者:馨健康【转载】   来自:brainnews脑科学   阅读

来源:瑞沃德生命科学

大鼠MCAO造模方法

(1) 麻醉成功后以仰卧位固定于手术台,常规备皮、消毒。将小鼠门齿利用缝合线钩住、固定,使得颈部被拉伸,方便接下来的手术操作。利用常规眼科剪或手术刀从颈部正中切开,从颈正中切口,利用镊子钝性分离颈部腺体组织、筋膜,暴露并分离颈总动脉( common carotid artery, CCA)、颈外动脉( external carotid artery, ECA)和颈内动脉( internal carotid artery, ICA)。

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(2) 分离ICA及其颅外分支翼颚动脉,利用缝合线打活结,结扎翼颚动脉,或者直接利用血管夹夹闭翼鄂动脉,避免线栓插入翼鄂动脉,保持CCA的唯一开放分支为ICA。

(3) 分离ECA主干,并利用电凝笔闭塞ECA的分支,结扎远心端并将其间断。在ECA残端用眼科剪剪开一“V”型小口,剪口之前用微动脉夹夹闭CCA和ICA,避免剪口处出现出血。将预处理过带硅胶头的线栓小心地从ECA插入。

(4) 去除ICA的微动脉夹后,插入尼龙线栓直至大脑中动脉的起始处,线栓插入17-18mm(见下图)。根据笔者的经验,线栓插入的长度应根据动物体重,如260~280g大鼠,插入深度约17mm,280g以上的大鼠,插入深度约18mm,总之,以遇到轻微的阻力为准,此时线栓正好进入颅内的大脑前动脉,阻塞大脑中动脉的开口。

MCAO线栓法模型操作主要步骤示意图:

(a) 在左颈外动脉远端做一切口,将线栓向颈总动脉方向插入,直至分叉口;

(b) 剪断颈外动脉后,将线栓以颈总外/颈内分又口为圆心逆时针旋转180°角,同时结扎翼膠动脉;

(c) 沿着颈内动脉方向进线,当达到15mm时要非常小心,缓慢进线,直至感觉到有轻微阻力为止。

(5) 若要恢复大脑中动脉的血流,只需把线栓拔出,使头端退到颈外动脉,颈总动脉的血流就可以再灌注到大脑中动脉。

(6) 结扎消毒后逐层缝合皮下组织和皮肤,等动物麻醉苏醒后放回笼中即可。

(7) 手术结束后应用激光散斑血流成像仪监测大脑皮层血流,当看到大脑皮层血液血流降低70%~80%,说明模型制备成功。

(8) 对照手术模型的制作步骤同前,但血管分离后不插入线栓,结扎消毒后缝合皮下组织及皮肤即可。

小鼠MCAO造模方法

小鼠MCAO模型的制作与大鼠的基本相同,可不结扎翼颚动脉,而是在进线栓时调整角度小心避开。其他不同之处在于,线栓为5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅胶),长度为15mm。根据动物体重的具体情况,线栓插入颈内动脉(10±0.5)mm即可,保证线栓正好进入颅内的大脑前动脉,阻塞大脑中动脉的开口。

如何提高MCAO造模成功率?

(1)挑选合适线栓,满足一下几点要求:

线栓不可过硬。过硬线栓容易找手感,但是容易出现刺破蛛网膜下腔血管,导致颅内出血。同时过硬线栓还会改变血管自然形态,当线栓插入血管以后,因为线栓过硬,血管肌张力无法使得线栓改变形态,只能被线栓改变形态,导致血管处于紧绷状态,对于再灌注操作不利。

选择硅胶头尽可能接近圆柱形的线栓,这样当线栓进入MCA外后,能够完全堵塞MCA,而不会出现缝隙,使得线栓可以立即阻塞MCA。

(2)采用散斑血流仪,实时观测颅脑血流情况。这样可以准确判断线栓是否阻塞MCA,一旦血流灌注量下降超过70%,即代表线栓阻塞MCA。

(3)MCAO线栓手术属于显微操作手术,不可控因素较多,需要多练习。一般常规连续练习3个月左右,即可实现造模;如果采用血流仪辅助造模,时间可以缩短至1个月,手术过程中可以实时调整线栓位置。另外现在发文越来越需要漂亮数据,瑞沃德的激光散斑血流仪RFLSI Ⅲ可提供高清漂亮血管血流分布图。




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